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Virus CAP:美国CAP室间质评病毒培养(VR1)项目介绍
发布时间:2012年05月25日 浏览数:3683

     美国CAP室间质评病毒培养项目名称为VR1。每年3次,分别在年初、年中和年末发出,每次6~7份标本。VR1项目尽管名称为病毒培养,但其中包含衣原体(仅沙眼衣原体和肺炎衣原体2个种)培养。为了最大限度保证病毒及衣原体微生物成活,VR1项目标本以冻干保存,冰袋冷藏邮寄。标本收到后2~8℃保存直到检测。所有VR1项目的病原体生物安全级别为BSL-II,无BSL-II以上高致病性微生物。回报结果的填写内容包括:①培养及鉴定的病原体;②培养细胞系/代码;③CPE出现的时间(天);④使用的鉴定方法/代码。2008-2011年四年12个批次的75份室间质评标本中,上呼吸道标本最多,占1/2~2/3,其中包括鼻咽洗液、鼻咽拭子和咽拭子,主要包括7种病毒,详细见表1。

                      表1. CAP室间质评2008-2011年标本种类/解剖部位及待检病毒


      CAP室间质评VR1项目特点是说明书要求实验室确定某份标本是否存在某种或某些病毒(如同一类的呼吸道类病毒),而非盲样标本,这样的针对性大大减轻了参加实验室室间质评的工作量。病毒培养和鉴定程度,不同的病原体要求不尽相同,为了更好的说明问题,现将部分标本北京协和医院检验科病毒实验室结果和回报列表2。


          表2. CAP室间质评VR1项目实验室结果报告和回报示例

表2. CAP室间质评VR1项目实验室结果报告和回报示例

      VR1病毒培养室间质评项目,CAP在统计结果时分为2个组分别进行,即一般实验室(Participants)和参考实验室(Referees),因标本、自身技术、是否存在常规项目及回报结果等原因,每个批次甚至每份标本的参加实验室的数目都不尽相同。
      在表2中,病毒培养和鉴定程度,不同的病毒要求不尽相同,有些甚至比较宽松。如VR1-015,2008标本肠道病毒鉴定到科都属于正确,尽管这些实验室仅占1.9%。我们也非常佩服相当比例(9.8%~19.2%)的实验室能够将VR1-015 2008标本准确鉴定为埃可病毒11型。对于某一份标本如果鉴定到型,一定是准确的,没有把握可鉴定至上一级种。如VR1-04 2008标本为单纯疱疹病毒2型,回报为单纯疱疹病毒也属于正确,但如果回报为单纯疱疹病毒1型则为错误。呼吸道病毒几乎参加实验室均可鉴定到型,尽管鉴定到种甚至非特异血球吸附试验也属于正确。其中原因是呼吸道病毒型特异性单克隆抗体研制的非常成功并广泛市场化,尤其是荧光素标记的单克隆抗体DFA染色技术,简单、快速和准确。
     【26】代码为教育项目,结果的统计不再区分一般实验室或参考实验室,也不计入各实验室成绩,目的是为实验室学习提供,参加实验室应保留室间质评试验的文件和记录。
      图1~图8显示我们实验室参加CAP室间质评VR1项目时病毒培养及鉴定时镜下细胞株、细胞病变形态和免疫荧光染色鉴定结果,供读者参考。

MRC-5人胚肺成纤维细胞株

图1. MRC-5人胚肺成纤维细胞株,美国ATCC CCL-171,其独特的条索状形态学特点非常有利于CPE的观察。×100

VR1-08, 2009 (BAL,肺泡灌洗物)标本

图2. VR1-08, 2009 (BAL,肺泡灌洗物)标本接种MRC-5后7天所产生的CPE, MRC-5条索状的成纤维细胞出现呈簇的细胞病变,表现为细胞变圆,折光性增强。×100。

VR1-08, 2009在接种MRC-5的7天后产生CPE

图3. VR1-08, 2009在接种MRC-5的7天后产生CPE(见图2.)。消化病变细胞制备细胞悬液涂片冷丙酮固定后,抗CMV单克隆抗体和抗鼠IgG荧光抗体间接法荧光法(IIF)染色阳性。×200。

VR1-08, 2009在接种MRC-5的7天后产生CPE

图4. VR1-08, 2009在接种MRC-5的7天后产生CPE(见图2.)。消化病变细胞制备细胞悬液涂片冷丙酮固定后,抗CMV单克隆抗体和抗鼠IgG荧光抗体间接法荧光法(IIF)染色阳性。荧光染色鉴定呈椭圆型或肾型位于细胞核。×400。

 VR1-11, 2009 (生殖道皮损标本)标本接种MRC-5后3天

图5. VR1-11, 2009 (生殖道皮损标本)标本接种MRC-5后3天所产生的CPE。MRC-5条索状的成纤维细胞出现整个面细胞变大,变圆,折光性增强,细胞面有较多粗大的细胞融合。×100。

VR1-11, 2009在接种MRC-5的3天后产生CPE

图6. VR1-11, 2009在接种MRC-5的3天后产生CPE(见图5.)。消化病变细胞制备细胞悬液涂片冷丙酮固定后,抗HSV-2单克隆抗体和抗鼠IgG荧光抗体间接法荧光法(IIF)染色阳性。×200。

 VR1-07, 2008(鼻咽拭子标本)接种HEp-2细胞后4天

图7. VR1-07, 2008(鼻咽拭子标本)接种HEp-2细胞后4天产生CPE病变。HEp-2细胞呈片状病变,细胞变圆,胞浆内颗粒增加,细胞面裂开出现空隙。×100。

VR1-07, 2008(鼻咽拭子标本)接种HEp-2细胞后4天

图8. VR1-07, 2008(鼻咽拭子标本)接种HEp-2细胞后4天产生CPE(见图7.),消化病变细胞制备细胞悬液涂片冷丙酮固定后,系列抗呼吸道病毒荧光单克隆抗体直接荧光法(DFA)染色阳性,结果为腺病毒阳性。×200。


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